人不對稱二甲基精氨酸（ADMA）ELISA檢測試劑盒使用說明書
本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫學診斷
人（human）不對稱二甲基精氨酸（adma）
elisa檢測試劑盒
使用說明書
檢測原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（elisa）。往預先包被不對稱二甲基精氨酸（adma）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、hrp標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物tmb顯色，tmb在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的不對稱二甲基精氨酸（adma）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（od 值），計算樣品濃度。
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：edta、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.酶標儀（450nm）
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul
3.37℃恒溫箱
操作注意事項
1.試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。
2.實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3.濃度為0的s0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍，最終結果乘以5才是樣本實際濃度。
4.嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5.所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標板
12孔×8條
12孔×4條
無
標準品
0.3ml*6管
0.3ml*6管
無
樣本稀釋液
6ml
3ml
無
檢測抗體-hrp
10ml
5ml
無
20×洗滌緩沖液
25ml
15ml
按說明書進行稀釋
底物a
6ml
3ml
無
底物b
6ml
3ml
無
終止液
6ml
3ml
無
封板膜
2張
2張
無
說明書
1份
1份
無
自封袋
1個
1個
無
注：標準品（s0-s5）濃度依次為：0、0.075、0.15、0.3、0.6、1.2μmol/l
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1.手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2.自動洗板機：每孔注入洗液350μl，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μl；
3.樣本孔先加待測樣本10μl，再加樣本稀釋液40μl；空白孔不加
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（hrp）標記的檢測抗體100μl，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物a、b各50μl，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μl，15min內，在450nm波長處測定各孔的od值。
結果判斷
繪制標準曲線：在excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應od值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1.準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數r值，大于等于0.9900。
2.靈敏度：最di檢測濃度小于0.01μmol/l。
3.特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4.重復性：板內、板間變異系數均小于15%。
5.貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.有效期：6個月
從2011年開始我們致力于在生命科學領域、生物醫學實驗外包及論文潤色服務，協助客戶各類實驗服務及論文潤色十多年，是您值得信賴的科研合作伙伴!
如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯系。
實驗代做服務：
免疫組化ihc染色實驗服務
細胞、組織tunel凋亡染色實驗服務
試劑盒免費代檢測
實驗室代做實驗項目
透射電鏡服務實驗服務
石蠟/冰凍切片tunel凋亡
核仁組成區嗜銀-agnor染色實驗服務
免疫共沉淀（chirp）實驗
rna結合蛋白免疫沉淀（rip）實驗代做
酶聯免疫（elisa）技術服務
雞傳染性法氏囊病病毒vp2抗體診斷試劑盒
喹諾酮類快速檢測試劑盒
組織芯片/微陣列定制技術服務
染色質免疫沉淀分析(clip)實驗服務
多因子液相芯片技術（luminex）實驗
免疫細胞化學icc實驗服務
atp/adp檢測實驗服務
蛋白雙向(2-d)電泳實驗服務
蛋白相互作用分析
堿性磷酸酶染色實驗服務
pkc活性檢測實驗
非標定量實驗
（label-free）
dige技術實驗服務
端粒酶活性檢測實驗
細胞生長曲線的測定
掃描電鏡服務
nf-kb p65活性檢測實驗
慢病毒包裝實驗服務
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污泥處理納米曝氣的應用
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覆銅陶瓷基板平均剝離力測試儀衡翼提供各種力學測試儀
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磁座鉆的關鍵部位
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elisa檢測試劑盒
使用說明書
檢測原理
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樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：edta、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
自備物品
1.酶標儀（450nm）
2.高精度加樣器及槍頭：0.5-10ul、2-20ul、20-200ul、200-1000ul
3.37℃恒溫箱
操作注意事項
1.試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。
2.實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
3.濃度為0的s0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍，最終結果乘以5才是樣本實際濃度。
4.嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
5.所有液體組分使用前充分搖勻。
試劑盒組成
名稱
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標板
12孔×8條
12孔×4條
無
標準品
0.3ml*6管
0.3ml*6管
無
樣本稀釋液
6ml
3ml
無
檢測抗體-hrp
10ml
5ml
無
20×洗滌緩沖液
25ml
15ml
按說明書進行稀釋
底物a
6ml
3ml
無
底物b
6ml
3ml
無
終止液
6ml
3ml
無
封板膜
2張
2張
無
說明書
1份
1份
無
自封袋
1個
1個
無
注：標準品（s0-s5）濃度依次為：0、0.075、0.15、0.3、0.6、1.2μmol/l
試劑的準備
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。
洗板方法
1.手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。
2.自動洗板機：每孔注入洗液350μl，浸泡1min，洗板5次。
操作步驟
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μl；
3.樣本孔先加待測樣本10μl，再加樣本稀釋液40μl；空白孔不加
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（hrp）標記的檢測抗體100μl，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物a、b各50μl，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μl，15min內，在450nm波長處測定各孔的od值。
結果判斷
繪制標準曲線：在excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應od值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
試劑盒性能
1.準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數r值，大于等于0.9900。
2.靈敏度：最di檢測濃度小于0.01μmol/l。
3.特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4.重復性：板內、板間變異系數均小于15%。
5.貯藏：2-8℃，避光防潮保存。
6.有效期：6個月
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