大腸桿菌轉化實驗
大腸桿菌轉化實驗
下面喆圖小編為大家介紹使用恒溫培養箱做大腸桿菌轉化實驗。
大腸桿菌轉化：（1）將重組dna分子導入大腸桿菌受體細胞進行復制，增殖和表達，以獲得目的基因；（2）驗證大腸桿菌感受態細胞效果；（3）用于分子生物學其他研究。熱擊法： 實驗方法原理：質粒dna或重組dna粘附在細菌細胞表面，經過42°c短時間的熱擊處理，促進吸收dna.然后在非選擇培養基中培養一代，待質粒上所帶的抗菌素基因表達，就可以在含抗菌素的培養基中生長。
實驗步驟：
一、實驗材料準備
1.器材 旋渦混合器，微量移液取樣器，移液器吸頭，1.5ml微量離心管，雙面微量離心管架，恒溫水浴鍋，制冰機，恒溫搖床，培養皿（已鋪好固體lb-amp），超凈工作臺，酒精燈，玻璃涂棒，恒溫培養箱。
2.試劑 培養基（不加抗菌素），lb培養基（加抗菌素），無菌ddh2o，iptg，x-gal。3.材料處理 無菌ddh2o，1.5ml離心管裝入鋁制飯盒（滅菌）、移液器吸頭裝入相應的吸頭盒（滅菌），20%iptg（m/v），2%x-gal（m/v，用n,n-二甲基甲酰胺配）。
二、操作步驟
1.事先將恒溫水浴的溫度調到42℃。
2.從-70℃超低溫冰柜中取出一管（100μl）感受態菌，立即用手指加溫融化后插入冰上，冰浴5~10min。
3.加入5μl連接好的質粒混合液（dna含量不超過100ng），輕輕震蕩后放置冰上20min。
4.輕輕搖勻后插入42℃水浴中1~2min進行熱休克，然后迅速放回冰中，靜置3~5min。
5.在超凈工作臺中向上述各管中分別加入500μllb培養基（不含抗菌素）輕輕混勻，然后固定到搖床的彈簧架上37℃震蕩1h。
6.在超凈工作臺中取上述轉化混合液100-300μl，分別滴到含合適抗菌素的固體lb平板培養皿中，用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻。
7.如果載體和宿主菌適合藍白斑篩選的話，滴完菌液后再在平板上滴加40μl2%x-gal，8μl20%iptg，用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻。
8.在涂好的培養皿上做上標記，先放置在37℃恒溫培養箱中30~60min直到表面的液體都滲透到培養基里后，再倒置過來放入37℃恒溫培養箱過夜。
9.在被細菌污染的桌面上噴灑70%乙醇，擦干桌面，寫實驗報告。 10.觀察平板上長出的菌落克隆，以菌落之間能互相分開為好。注意白色菌斑。
注意事項：1.玻璃涂布棒上的酒精熄滅后稍等片刻，待其冷卻后再涂。
詳情可咨詢喆圖客服。（恒溫搖床、恒溫水浴鍋、恒溫培養箱）
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1.器材 旋渦混合器，微量移液取樣器，移液器吸頭，1.5ml微量離心管，雙面微量離心管架，恒溫水浴鍋，制冰機，恒溫搖床，培養皿（已鋪好固體lb-amp），超凈工作臺，酒精燈，玻璃涂棒，恒溫培養箱。
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二、操作步驟
1.事先將恒溫水浴的溫度調到42℃。
2.從-70℃超低溫冰柜中取出一管（100μl）感受態菌，立即用手指加溫融化后插入冰上，冰浴5~10min。
3.加入5μl連接好的質粒混合液（dna含量不超過100ng），輕輕震蕩后放置冰上20min。
4.輕輕搖勻后插入42℃水浴中1~2min進行熱休克，然后迅速放回冰中，靜置3~5min。
5.在超凈工作臺中向上述各管中分別加入500μllb培養基（不含抗菌素）輕輕混勻，然后固定到搖床的彈簧架上37℃震蕩1h。
6.在超凈工作臺中取上述轉化混合液100-300μl，分別滴到含合適抗菌素的固體lb平板培養皿中，用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻。
7.如果載體和宿主菌適合藍白斑篩選的話，滴完菌液后再在平板上滴加40μl2%x-gal，8μl20%iptg，用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻。
8.在涂好的培養皿上做上標記，先放置在37℃恒溫培養箱中30~60min直到表面的液體都滲透到培養基里后，再倒置過來放入37℃恒溫培養箱過夜。
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