1.
封閉將封閉溶液添加至樣品中。
孵育
去除封閉溶液
2.
一抗將一抗在適當的緩沖液中稀釋，并添加至樣品中。
孵育
在合適的緩沖液清洗兩次，每次5分鐘
3.
將兩份pla®探針，以1：5的比例在適當的緩沖液中稀釋，并添加至樣品中。
+37 °c孵育60分鐘用1 x洗滌液a清洗2次，每次5分鐘
4.
在h2o中以1：5的比例稀釋連接儲液。
在該溶液中以1:40比例稀釋連接酶并將混合物添加至樣品中。
+37 °c孵育30分鐘用1 x洗滌液a清洗2次，每次2分鐘
5.
在h2o中以1：5的比例稀釋擴增儲液。在該溶液中以1:80比例稀釋聚合酶并將混合物添加至樣品中。
+37 °c孵育100分鐘用1 x洗滌液b清洗2次，每次10分鐘用0.01x洗滌液b清洗1分鐘
6.
成像準備使用含有dapi的duolink原位封固劑加載樣品，等待15分鐘，然后在熒光或共聚焦顯微鏡下進行分析。
注意：
使用沒有蓋玻片的開放液滴反應，并在加濕室中進行所有孵育。
請使用冷凍塊將酶從冷凍室（-20oc）中取出。
應在搖床上以最小體積（70毫升），并輕微搖晃進行清洗。

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