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百螢課堂之-細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)測(cè)定

細(xì)胞增殖測(cè)定是在細(xì)胞生物學(xué)和藥物發(fā)現(xiàn)研究中具有廣泛應(yīng)用價(jià)值的工具。它們通常用于評(píng)估正常細(xì)胞的健康狀況,對(duì)評(píng)估新型化療藥物的抗增殖效力和復(fù)合毒性至關(guān)重要。aat bioquest 提供了幾種評(píng)估細(xì)胞增殖的策略,這些策略基于跟蹤細(xì)胞分裂的世代或監(jiān)測(cè)細(xì)胞健康的關(guān)鍵參數(shù),包括代謝活性、 dna 合成或 atp 濃度。從廣泛的傳統(tǒng)比色測(cè)定試劑中選擇用于確定細(xì)胞增殖的試劑,特別是四唑鹽,以及用于流式細(xì)胞術(shù)、成像和微孔板應(yīng)用的幾種高度敏感的基于熒光的測(cè)定方法。
一.細(xì)胞增殖的測(cè)定方法
測(cè)定細(xì)胞增殖準(zhǔn)確的方法是在 dna 復(fù)制過(guò)程中通過(guò) brdu摻入來(lái)測(cè)定新合成的 dna。盡管這種方法具有高度的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性,但由于隨后用熒光抗 brdu 抗體進(jìn)行檢測(cè)是測(cè)量增殖所必需的,因此這種方法可能相當(dāng)繁瑣。或者,通過(guò)用 wst,resazurin 或細(xì)胞酯酶分離染料測(cè)量代謝活性的速率或用 cytotelltm 染料或 cfse 跟蹤細(xì)胞分裂的世代,可以更快地評(píng)估細(xì)胞增殖。最終,選擇適合的細(xì)胞增殖試驗(yàn)主要取決于細(xì)胞類型,研究方案,以及希望研究的作用機(jī)制。
二.dna合成細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
原位測(cè)定新合成的 dna 是鑒定增殖細(xì)胞可靠、精確的方法。實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)的方法是在細(xì)胞周期的 s 期將 brdu細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑 (17030)添加到新復(fù)制的 dna 中。然后可以使用熒光標(biāo)記的抗 brdu 抗體來(lái)測(cè)量增殖的 brdu 標(biāo)記細(xì)胞。brdu 染色適用于各種應(yīng)用,包括 ihc、 icc 和 elisa,并且可以用流式細(xì)胞術(shù)中適合的其他生物標(biāo)志物進(jìn)行染色。我們提供用 pe (v103305)標(biāo)記的小鼠單克隆抗 brdu 抗體克隆 bu20a 和未標(biāo)記的小鼠單克隆抗 brdu 抗體克隆 bu20a (v103300)和克隆 mobu-1(v103295)的熒光綴合物,其可以用我們最亮和光穩(wěn)定的 ifluor系列染料標(biāo)記。
點(diǎn)擊-化學(xué)驅(qū)動(dòng)的 bucculitetm xdu 細(xì)胞增殖測(cè)定
與 brdu 測(cè)定不同,bucculitetm xdu 細(xì)胞增殖測(cè)定不依賴于抗體來(lái)量化新生 dna,也不需要 dna 變性來(lái)促進(jìn) brdu 標(biāo)記核苷的抗體檢測(cè)。相反,bucculitetm xdu 細(xì)胞增殖測(cè)定使用含炔的胸苷類似物 xdu 的專有混合物,其摻入到新合成的 dna 中,隨后通過(guò)銅催化的疊氮化物-炔環(huán)加成檢測(cè)(即單擊反應(yīng),圖1)。
細(xì)胞增殖測(cè)定原理。在 xdu 存在下的增殖細(xì)胞在 s 期加入了胸腺嘧啶堿基的化合物。熒光標(biāo)記的疊氮化合物與摻入的 xdu 反應(yīng),以便通過(guò)成像或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)(圖在 biorender 中制作)。
由于點(diǎn)擊反應(yīng)利用雙正交部分檢測(cè)增殖細(xì)胞,背景干擾是小的。更重要的是,由于反應(yīng)條件溫和,bucculitetmxdu 細(xì)胞增殖測(cè)定法保留了細(xì)胞形態(tài),抗原結(jié)合位點(diǎn)和樣品完整性,為用戶提供了用細(xì)胞周期染料,針對(duì)細(xì)胞表面標(biāo)記物的抗體和熒光蛋白進(jìn)行多重分析的機(jī)會(huì)。在 xdu 摻入后,點(diǎn)擊反應(yīng)和隨后的洗滌步驟可以在60分鐘內(nèi)完成,并且新生 dna 可以使用標(biāo)準(zhǔn)成像系統(tǒng)或流式細(xì)胞儀進(jìn)行定量。還提供環(huán)境安全的無(wú)銅 bucculitetmfdu 細(xì)胞增殖測(cè)定綠色,紅色和深紅色熒光。這些試劑盒利用我們的buccuttetm標(biāo)記化學(xué),以促進(jìn)檢測(cè)新合成的 dna 在活躍增殖的細(xì)胞。
用 bucculitexdu 細(xì)胞增殖試驗(yàn)檢測(cè) il 細(xì)胞增殖。使用 bucculite xdu 細(xì)胞增殖 ifluor488成像試劑盒(22326)和 bucculite xdu 細(xì)胞增殖 ifluor647成像試劑盒(22328)中提供的試劑和固定/檢測(cè)方案處理 hela 細(xì)胞。兩個(gè)樣本均用 hoechst 33342核酸染色(17530)進(jìn)行復(fù)染,并用熒光顯微鏡成像。
產(chǎn)品名稱
規(guī)格
貨號(hào)
bucculite xdu細(xì)胞增殖熒光成像試劑盒“紅色熒光”
200tests
22327
bucculite xdu細(xì)胞增殖熒光成像試劑盒“綠色熒光”
200tests
22326
bucculite xdu細(xì)胞增殖熒光成像試劑盒“深紅色熒光”
200tests
22328
bucculite xdu細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒“紅色熒光兼容”“流式細(xì)胞術(shù)”
100tests
22325
bucculite xdu細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒“藍(lán)色激光兼容”“流式細(xì)胞術(shù)”
100tests
22323
bucculite fdu細(xì)胞增殖熒光成像試劑盒“紅色熒光”“無(wú)銅”
200tests
22315
bucculite fdu細(xì)胞增殖熒光成像試劑盒“綠色熒光”“無(wú)銅”
200tests
22305
bucculite fdu細(xì)胞增殖熒光成像試劑盒“深紅色熒光”“無(wú)銅”
200tests
22320
brutp*10mm溶于te buffer*細(xì)胞增殖檢測(cè)
100ul
17032
brdutp*10mm溶于te buffer*細(xì)胞增殖檢測(cè)
100ul
17031
表1.可用于流式細(xì)胞術(shù)和增殖實(shí)驗(yàn)的產(chǎn)品
關(guān)鍵詞:流式細(xì)胞儀 熒光顯微鏡

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