乳酸脫氫酶檢測線說明書
乳酸脫氫酶檢測線說明書
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：
ldh（ec 1.1.1.27）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是糖酵解途徑的末端酶，催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應，伴隨著 nad+/nadh 之間互變。
測定原理：
乳酸脫氫酶檢測線說明書ldh 催化 nad+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸進一步與 2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中顯棕紅色，顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：30ml×1 瓶， 4℃保存；
試劑一：液體 15 ml×1 瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×1 支，-20℃保存，用時加入 1.3 ml 蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
試劑三：液體 15 ml×1 瓶，4℃保存；
試劑四：液體 50 ml×1 瓶，4℃保存；
樣品測定的準備：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104 個）：提取液體積（ml）為 1000~5000：1 的比例（建議 2000 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200w，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。2、血清（漿）樣品：直接檢測。
乳酸脫氫酶檢測線說明書測定步驟：
1、 分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 450nm，蒸餾水調零。
2、樣本測定（在 ep 管中加入下列試劑）
試劑名稱(μl) 測定管 對照管
樣本 50 50
試劑一 250 250
試劑二 50
蒸餾水 50
充分混勻，37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 15min
試劑三 250 250
充分混勻，37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 15min
試劑四 750 750
充分混勻，室溫靜置 3 分鐘，450 nm 下測定吸光度，計算 δa=a 測定管-a 對照管。每個測
定管需要設一個對照管。
ldh 活力單位的計算：
1、標準條件下測定的回歸曲線， y = 0.725x (x 為標準品濃度，umol/ml；y 為對吸光度)。2、血清（漿）ldh 活力的計算單位的定義：每 ml 血清（漿）每分鐘催化產生 1nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。
ldh（nmol/min/ml）=δa÷0.725÷t×103=92×δa
3、細胞、細菌和組織中 ldh 活力的計算（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產生 1 nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。
ldh（nmol/min/mg prot）=[δa÷0.725×v1]÷(v1×cpr)÷t×103 =92×δa÷cpr
需要另外測定，建議使用本公司 bca 蛋白質含量測定試劑盒。（2） 按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織每分鐘催化產生 1nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。
ldh（nmol/min/g 鮮重）=[δa÷0.725×v1]÷(w×v1÷v2)÷t×103 =92×δa÷w
（3）按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘催化產生 1nmol 丙酮酸定義為一個酶活力單位。
ldh（nmol/min/104 cell）= [δa÷0.725×v1]÷(2000×v1÷v2)÷t×103 =0.046×δa
v1：加入反應體系中樣本體積，0.05ml；v2：加入提取液體積，1 ml；t：反應時間，15 min；cpr：蛋白質濃度，mg/ml；w：樣本質量，g；2000：細胞或細菌總數，2000 萬。
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需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：30ml×1 瓶， 4℃保存；
試劑一：液體 15 ml×1 瓶， 4℃保存；
試劑二：粉劑×1 支，-20℃保存，用時加入 1.3 ml 蒸餾水充分溶解備用，用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復凍融；
試劑三：液體 15 ml×1 瓶，4℃保存；
試劑四：液體 50 ml×1 瓶，4℃保存；
樣品測定的準備：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備：
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