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RNA樣品的的抽提

樣品rna的抽提
①取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的trizol試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯方,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯相,中間層以及無色水相上層。rna全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的trizol試劑的60%。
③rna沉淀 將水相上層轉移到一干凈無rna酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的rna,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的rna沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④rna清洗 移去上清液,每1mltrizol試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用depch2o配制),清洗rna沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤rna干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使rna沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解rna沉淀 溶解rna時,先加入無rna酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的rna溶液保存于-80℃待用。

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